Suyuqlik xromatografiyasi yordamida miqdoriy tahlil qilish tamoyillari va usullari

Suyuq xromatografiyaning ajratish mexanizmi aralashmadagi komponentlarning ikki fazaga yaqinligidagi farqga asoslanadi.

Har xil statsionar fazalarga ko'ra suyuq xromatografiya suyuq-qattiq xromatografiya, suyuq-suyuq xromatografiya va bog'langan fazali xromatografiyaga bo'linadi.Eng ko'p qo'llaniladigan suyuqlik-qattiq xromatografiya, plomba sifatida silika jeli va matritsa sifatida mikrosilikat bilan bog'langan fazali xromatografiya.

Statsionar faza shakliga ko'ra, suyuq xromatografiyani ustunli xromatografiya, qog'oz xromatografiyasi va yupqa qatlamli xromatografiyaga bo'lish mumkin.Adsorbsiya qobiliyatiga ko'ra uni adsorbsion xromatografiya, bo'linish xromatografiyasi, ion almashinuvi xromatografiyasi va jel o'tkazuvchanlik xromatografiyasiga bo'lish mumkin.

So'nggi yillarda suyuqlik ustunining xromatografiya tizimiga yuqori bosimli suyuqlik oqimi tizimi qo'shildi, bu ajratish effektini yaxshilash uchun yuqori bosim ostida mobil fazani tez oqishini ta'minlaydi, shuning uchun yuqori samarali (yuqori bosim sifatida ham tanilgan) suyuqlik xromatografiyasi. paydo bo'ldi.

QISM
01 Suyuqlik xromatografiyasini miqdoriy tahlil qilish printsipi

Sifat asosida miqdorini aniqlash uchun standart sifatida toza moddalar talab qilinadi;

Suyuqlik xromatografiyasi miqdorini aniqlash nisbatan miqdoriy usuldir: ya'ni aralashmadagi analit miqdori ma'lum miqdordagi sof standart namunadan hisoblanadi.

QISM
02 Suyuqlik xromatografiyasi yordamida miqdorni aniqlash uchun asos

O'lchangan komponentning miqdori (W) javob qiymatiga (A) proportsionaldir (cho'qqi balandligi yoki tepalik maydoni), W = f × A.

Miqdoriy tuzatish koeffitsienti (f): Bu miqdoriy hisoblash formulasining mutanosiblik konstantasi va uning jismoniy ma'nosi - birlik javob qiymati (cho'qqi maydoni) bilan ifodalangan o'lchangan komponentning miqdori.

Miqdoriy tuzatish omili standart namunaning ma'lum miqdori va uning javob qiymatidan olinishi mumkin.

Noma'lum komponentning javob qiymatini o'lchang va komponent miqdori miqdoriy tuzatish omili bilan olinishi mumkin.

QISM
03 Miqdoriy tahlilda umumiy atamalar

Namuna (namuna): xromatografik tahlil uchun analitni o'z ichiga olgan eritma.Standart va noma'lum namunalarga bo'lingan.

Standart: Konsentratsiyasi ma'lum bo'lgan sof mahsulot.Noma'lum namuna (noma'lum): Konsentratsiyasi sinovdan o'tkazilishi kerak bo'lgan aralashma.

Namuna og'irligi: sinovdan o'tkaziladigan namunaning asl og'irligi.

Suyultirish: noma'lum namunaning suyultirish koeffitsienti.

Komponent: miqdoriy tahlil qilinadigan xromatografik cho'qqi, ya'ni tarkibi noma'lum bo'lgan tahlil qiluvchi modda.

Komponentning miqdori (miqdori): tekshiriladigan moddaning tarkibi (yoki konsentratsiyasi).

Butunlik: Xromatografik cho'qqining tepalik maydonini kompyuter yordamida o'lchashning hisoblash jarayoni.

Kalibrlash egri chizig'i: Analitning noma'lum tarkibini aniqlash uchun ishlatiladigan standart moddaning ma'lum miqdoridan o'rnatilgan komponent tarkibining javob qiymatiga nisbatan chiziqli egri chizig'i.

QISM
04 Suyuqlik xromatografiyasining miqdoriy tahlili

1. Miqdoriy tahlil uchun mos xromatografik usulni tanlang:

l Aniqlangan komponentning cho'qqisini tasdiqlang va 1,5 dan yuqori ruxsat (R) ga erishing

l Sinov qilingan komponentlarning xromatografik cho'qqilarining mustahkamligini (tozaligini) aniqlang

l usulning aniqlash chegarasi va miqdoriy chegarasini aniqlang;sezgirlik va chiziqli diapazon

2. Turli konsentratsiyali standart namunalar bilan kalibrlash egri chizig'ini o'rnating

3. Miqdoriy usullarning aniqligi va aniqligini tekshirish

4. Namuna to'plash, ma'lumotlarni qayta ishlash va hisobot natijalarini amalga oshirish uchun tegishli xromatografiya boshqaruv dasturidan foydalaning

QISM
05 Miqdoriy cho'qqilarni aniqlash (sifat)

Miqdorini aniqlash uchun har bir xromatografik cho'qqini sifat jihatidan aniqlang

Birinchidan, miqdoriy aniqlash uchun xromatografik cho'qqining ushlab turish vaqtini (Rt) aniqlash uchun standart namunadan foydalaning.Saqlash vaqtini taqqoslab, noma'lum namunadagi har bir xromatografik cho'qqiga mos keladigan komponentni toping.Xromatografik sifat usuli saqlanish vaqtini standart namuna bilan solishtirishdan iborat.Mezon yetarli emasqo'shimcha tasdiqlash (sifat)

1. Standart qo'shish usuli

2. Bir vaqtning o'zida boshqa usullardan foydalaning: boshqa xromatografik usullar (mexanizmni o'zgartirish, masalan: turli xil xromatografik ustunlar yordamida), boshqa detektorlar (PDA: spektrni taqqoslash, spektr kutubxonasini qidirish; MS: massa spektrini tahlil qilish, spektr kutubxonasini qidirish)

3. Boshqa asboblar va usullar

QISM
06 Miqdorlik cho'qqisining izchilligini tasdiqlash

Xromatografik maksimal mustahkamlikni (tozalik) tasdiqlang

Har bir xromatografik cho'qqi ostida faqat bitta o'lchangan komponent mavjudligiga ishonch hosil qiling

Birgalikda ajraladigan moddalar (iflosliklar) ta'sirida shovqin mavjudligini tekshiring.

Xromatografik cho'qqining mustahkamligini (tozaligini) tasdiqlash usullari

Fotodiodli matritsa (PDA) detektorlari bilan spektrogrammalarni solishtirish

Eng yuqori soflikni aniqlash

2996 Tozalik burchagi nazariyasi

07-QISMda keng qo'llaniladigan miqdoriy usullar

Standart egri chiziq usuli, tashqi standart usul va ichki standart usulga bo'linadi:

1. Tashqi standart usuli: eng ko'p suyuqlik xromatografiyasida qo'llaniladi

Standart namunalar sifatida sinovdan o'tkaziladigan aralashmalarning sof namunalari yordamida ma'lum konsentratsiyalarning bir qator standart namunalari tayyorlandi.uning javob qiymatiga qadar ustunga AOK qilinadi (pik maydoni).
Muayyan diapazonda standart namuna kontsentratsiyasi va javob qiymati o'rtasida yaxshi chiziqli bog'liqlik mavjud, ya'ni W= f×A va standart egri chiziq hosil bo'ladi.

Aynan bir xil eksperimental sharoitlarda o'lchanadigan komponentning javob qiymatini olish uchun noma'lum namunani AOK qiling.Ma'lum f koeffitsientiga ko'ra, o'lchanadigan komponentning kontsentratsiyasini olish mumkin.

Tashqi standart usulning afzalliklari:oddiy operatsiya va hisoblash, bu keng tarqalgan ishlatiladigan miqdoriy usul;har bir komponentni aniqlash va elutsiya qilishning hojati yo'q;standart namuna talab qilinadi;standart namuna va noma'lum namunani o'lchash shartlari mos kelishi kerak;in'ektsiya hajmi aniq bo'lishi kerak.

Tashqi standart usulning kamchiliklari:Eksperimental sharoitlarning yuqori bo'lishi talab qilinadi, masalan, detektorning sezgirligi, oqim tezligi va mobil fazaning tarkibini o'zgartirish mumkin emas;har bir inyeksiyaning hajmi yaxshi takrorlanuvchanlikka ega bo'lishi kerak.

2. Ichki standart usuli: aniq, ammo muammoli, standart usullarda eng ko'p qo'llaniladi

Aralash standartni yaratish uchun standartga ma'lum miqdordagi ichki standart qo'shiladi va ma'lum konsentratsiyaning bir qator ishchi standartlari tayyorlanadi.Aralash standartdagi standartning ichki standartga molar nisbati o'zgarishsiz qoladi.Xromatografik ustunga in'ektsiya qiling va javob qiymati sifatida (standart namunaning eng yuqori maydoni/ichki standart namunaning cho'qqi maydoni) oling.Javob qiymati va ishchi standartning konsentratsiyasi o'rtasidagi chiziqli munosabatga ko'ra, ya'ni W= f×A , standart egri chiziq hosil bo'ladi.

Noma'lum namunaga ma'lum miqdordagi ichki standart qo'shiladi va o'lchanadigan komponentning javob qiymatini olish uchun ustunga AOK qilinadi.Ma'lum f koeffitsientiga ko'ra, o'lchanadigan komponentning kontsentratsiyasini olish mumkin.

Ichki standart usulining xususiyatlari:Amaliyot davomida namuna va ichki standart aralashtiriladi va xromatografik ustunga AOK qilinadi, shuning uchun o'lchangan komponent miqdorining aralash eritmadagi ichki standartga nisbati doimiy bo'lsa, namuna hajmining o'zgarishi. miqdoriy natijalarga ta'sir qilmaydi..Ichki standart usul namuna hajmining, hatto mobil faza va detektorning ta'sirini bartaraf qiladi, shuning uchun u tashqi standart usuldan ko'ra aniqroqdir.

QISM
08 Miqdoriy tahlil natijalariga ta'sir etuvchi omillar

Noto'g'ri aniqlik quyidagilarga olib kelishi mumkin:

Noto'g'ri cho'qqi maydoni integratsiyasi, namunaning parchalanishi yoki namunani tayyorlash paytida kiritilgan aralashmalar, namuna flakonining muhrlanmaganligi, namuna yoki erituvchining uchuvchanligi, noto'g'ri namuna tayyorlash, namunani yuborish bilan bog'liq muammolar, noto'g'ri ichki standart tayyorlash

Yomon aniqlikning mumkin bo'lgan sabablari:

Noto'g'ri cho'qqi integratsiyasi, in'ektsiya yoki injektor muammolari, namunaning parchalanishi yoki namunani tayyorlash paytida kiritilgan aralashmalar, xromatografik muammolar, buzilgan detektor javobi