Mobil faza qonning suyuq fazasiga teng, va foydalanish paytida e'tibor berish kerak bo'lgan turli narsalar mavjud. Ular orasida e'tibor berish kerak bo'lgan ba'zi "tuzoqlar" mavjud.
01. Organik erituvchi qo'shgandan keyin mobil fazaning pH qiymatini o'lchang
Agar siz pH ni organik qo'shimchalar bilan o'lchasangiz, olingan pH organik erituvchini qo'shishdan oldingidan farq qiladi. Biroq, eng muhimi, izchil bo'lishdir. Agar siz har doim organik erituvchi qo'shgandan keyin pH ni o'lchasangiz, boshqalar ham xuddi shunday usulga amal qilishlari uchun siz foydalanadigan usulda qadamlaringizni ko'rsating. Bu usul 100% aniq emas, lekin hech bo'lmaganda usulni izchil saqlaydi. Bu aniq pH qiymatini olishdan ko'ra muhimroq bo'lishi mumkin.
02. Bufer ishlatilmaydi
Buferning maqsadi pH ni nazorat qilish va uning o'zgarishini oldini olishdir. Ko'pgina boshqa usullar mobil fazaning pH qiymatini o'zgartiradi, bu esa ushlab turish vaqti, tepalik shakli va eng yuqori reaktsiyaning o'zgarishiga olib kelishi mumkin.
Chumoli kislotasi, TFA va boshqalar bufer emas
03. Oddiy pH oralig'ida buferdan foydalanmaslik
Har bir bufer 2 pH birligi diapazoni kengligiga ega, uning ichida u eng yaxshi pH barqarorligini ta'minlaydi. Ushbu oynadan tashqaridagi tamponlar pH o'zgarishlariga samarali qarshilik ko'rsatmaydi. To'g'ri diapazonda buferdan foydalaning yoki sizga kerak bo'lgan pH diapazonini qoplaydigan buferni tanlang.
04. Organik eritmaga bufer qo'shing
Bufer eritmasini organik faza bilan aralashtirish, ehtimol, buferning cho'kishiga olib keladi. Ko'p hollarda, hatto yog'ingarchilik sodir bo'lgan bo'lsa ham, uni aniqlash qiyin. Suvli fazaga har doim organik eritma qo'shishni unutmang, bu bufer yog'ingarchilik ehtimolini sezilarli darajada kamaytiradi.
05. Konsentratsiya gradientini 0% dan nasos bilan aralashtiring
Bugungi kunda mavjud bo'lgan nasoslar mobil fazalarni va inline gazsizlantirishni samarali aralashtirishi mumkin, ammo sizning usulingizdan foydalanadigan har bir kishi yuqori sifatli nasosga ega bo'lmaydi. A va B ni bitta probirkaga aralashtiring va uni 100% inline ishlating.
Masalan, 950 ml organik boshlang'ich aralashmani 50 ml suv bilan aralashtirish orqali tayyorlash mumkin. Buning afzalligi shundaki, u HPLClar orasidagi o'zgaruvchanlikni kamaytirishi va tizimda pufakchalar va yog'ingarchiliklar ehtimolini kamaytirishi mumkin. Shunisi e'tiborga loyiqki, nasos aralashmasining nisbati 95: 5 ni tashkil qiladi, bu shishada oldindan aralashtirilgan saqlash muddati ham 95: 5 ni tashkil qiladi degani emas.
06. Buferni o'zgartirish uchun to'g'ri o'zgartirilgan kislota (asos) dan foydalanmaslik
Faqat siz foydalanayotgan tampon tuzini hosil qiluvchi kislota yoki asosdan foydalaning. Misol uchun, natriy fosfat tamponini faqat fosforik kislota yoki natriy gidroksid bilan tayyorlash kerak.
07. Usulda bufer haqidagi barcha ma'lumotlarni ko'rsatmaslik, masalan, 5g.1000 ml suv uchun natriy fosfat.
Bufer turi buferlanishi mumkin bo'lgan pH diapazonini aniqlaydi. Kerakli konsentratsiya bufer kuchini aniqlaydi. 5 gramm yoki suvsiz natriy fosfat va 5 gramm monosodyum fosfat monohidrat turli xil bufer quvvatiga ega.
08. Tekshirishdan oldin organik erituvchilarni qo'shish
Agar oldingi usulda asosiy B uchun bufer eritmasidan foydalanilgan bo'lsa va sizning usulingiz asosiy B uchun organik eritmadan foydalansa, siz buferni nasos trubkasi va nasos boshiga joylashtirishingiz mumkin.
09. Shishani ko'taring va oxirgi tomchini bo'shating
Butun yugurishni yakunlash uchun sizda etarli mobil faza bo'lmasligi va namunangiz chekish ehtimoli bor. Nasos tizimi va ustunni yoqish ehtimoli bilan bir qatorda, mobil faza butunlay bug'lanadi va shishaning yuqori qismidagi mobil faza o'zgaradi.
10. Ultrasonik gazsizlantiruvchi mobil fazadan foydalaning
Eng muhim nuqta, barcha tampon tuzlarining eritilganligiga ishonch hosil qilishdir, ammo bu gazsizlantirishning eng yomon usuli va mobil fazani tezda isitadi, bu esa organik tarkibiy qismlarning bug'lanishiga olib keladi. Keraksiz muammolarni keyinroq saqlab qolish uchun mobil fazangizni changyutkichdan tozalash uchun besh daqiqa vaqt ajrating.
Yuborilgan vaqt: 27-avgust 2024-yil